对两个荧光通道的荧光可以通过Ratio方法进行分析,当然,荧光通道可根据荧光的发射波长范围,用相应的二色镜和光栅来设定。例如可对第二个通道的荧光和第一个通道的荧光做比值,ch2(intensity)/ch1(intensity),不同的颜色代表不同的比值,可通过直接观察颜色的变化来分析两个通道荧光强度的变化。还可根据实际情况选择不同的公式,也可用来分析FRET效率和离子浓度。
细胞染色后,加入金属离子,观察其对荧光强度的影响。405nm激发,两个通道收集,ch1(425nm-480nm), ch2(500nm-530nm),刻度标尺为荧光强度值。
Ratio通道,对以上两个荧光通道,ch2和ch1荧光强度做比值,刻度标尺为ch2(intensity)/ch1(intensity)值,可通过直接观察颜色的变化来分析两个通道荧光强度的变化。
另外,因激光使用AOTF(Acoustic Optical Tunable Filter)进行控制,也就是可任意区域和任意激发强度的选择,因此可用于FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP (Fluorescence Loss in photobleaching) 以及 FRET(Fluorescence Resonance Energy Transfer)。
|