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荧光数据的可靠性分析
发布时间:2019-01-31 09:23:00.0  |  【打印】 【关闭

光谱仪器并不是理想的仪器光谱测试得到的显微图像或谱图需进行判断是否真实地反应了样品的性质。对于荧光光谱仪,光源Xe灯在各个波长下的能量不同(图1),光电倍增管(PMT)对各个波长检测的灵敏度不同(图2),激发和发射单色器(光栅)、滤光片和聚光镜等光学元件对各个波长透过率不同。因此,仪器工程师会用标准光源对PMT和整个光路进行校准,获得校正文件,对发射光谱进行校准。激发光谱的校正用一个参比检测器对光源各个波长的能量进行实时校正。因此,在进行发射光谱和激发光谱测定时,需要对仪器实际测得的数据进行校正,以接近样品真实的情况。但在PMT检测波长范围的两端,比如检测器范围为230-900nm,在230nm和900nm附近,PMT检测信号弱,校正文件经常把一些噪音认定为是信号,发生过校正现象。因此,校正过的光谱要与仪器实际测得的光谱进行比较,如仪器实际测得的光谱在检测器两端没有信号,而校正过的光谱有信号,那可能是过校正了。因此,在检测器两端的光谱校正要很谨慎。

 

详情见http://cpam.iccas.ac.cn/doclist.action?chnlid=3655

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